CCL4诱导小鼠肝脏纤维化模型

中文名称:	CCL4诱导小鼠肝脏纤维化模型	英文名称:	CCL4-induced mice liver fibrosis model
类型:	肝纤维化动物模型	分级:	NA
研制单位:	中国医学科学院医学实验动物研究所	保存单位:	中国医学科学院医学实验动物研究所
主要用途:	用于抗肝损伤和纤维化药物评估的主要研究模型。
是否通过鉴定与评价:

一、研究背景

肝纤维化是一个病理生理过程，是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生。任何肝脏损伤在肝脏修复愈合的过程中都有肝纤维化的过程，如果损伤因素长期不能去除，纤维化的过程长期持续就会发展成肝硬化。临床症状常见疲乏无力、食欲减退、慢性消化不良、出血等。治疗主要是针对原发病的病因治疗。病因多见于病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝、自身免疫性疾病等。

四氯化碳动物模型是目前应用于抗肝损伤和纤维化药物评估的主要研究模型。其作用机制为：在肝细胞内质网中，四氯化碳被肝微粒体细胞色素P450氧化酶激活后生成三氯化碳，与肝细胞内大分子发生共价结合，破坏肝细胞功能。此外，还可攻击肝细胞膜的磷脂，引起脂质过氧化破坏膜性结构，损伤肝细胞。

二、制备方法

 1.C57小鼠，

品系来源 ：1)遗传背景及亚系:1921年Ltle用 Abbg Lathrop的小鼠株雌鼠57号与雄鼠52号交配，而得C57BL6。亚系:C57BL6、C57B/6、C57BL/6N等。             (2)毛色基因标记：aa、BB、CC（黑色）                                          

(3)主要遗传学特征：a免疫学特征：一般饲养条件下免疫球蛋白的量随年龄而增加，而到生后20个月时则1gG增长缓慢，无菌饲养的绝对量较低。IgM水平较高，出生12月以后，有的个体超过80ug/mL。无菌饲养的动物lgM量比一般饲养的高。细胞免疫低下者少见，这可能与自发肿瘤少有关。b。形态学特征：在新生鼠中，雌鼠为16.8%，雄鼠3%为小眼或无眼症。0.6%后肢可见多趾症，另外水头症占2%~4%，耳头症占0.4%，交合不全占3%。c生理学特性：有强嗜酒精性。对放射性照射为中等强度感应度，LD50为630+4R，将雄鼠皮肤移植到同系的雌鼠身上，约20日被排斥掉，这是因为在组织相容性抗原中的雄抗原在C57BL中非常显著。d癌发生率：乳癌发生率低,不足1%，白血病为7%-16%化学致癌成功率低，放射性照射较容易诱发肝癌。

 2.肝纤维化对照小鼠：C57 小鼠 ，专业名称：C57。

3.诱导方法：腹腔注射CCl4的油剂溶液（50 ul/10g体重，CCl4：橄榄油=1:9），每周注射三次，隔一天一次，连续注射4-6周，每周称重一次，实验结束前，禁食4小时，取血液测量血生化等指标，取肝脏进行称重，病理及相关蛋白分析。

三、评价与验证

一、肝脏大体形态变化

腹腔注射CCl4的油剂溶液（50 ul/10g体重，CCl4：橄榄油=1:9），每周注射三次，隔一天一次，连续注射4周，取肝脏组织。

二、肝脏纤维化指标检测

腹腔注射CCl4的油剂溶液（50 ul/10g体重，CCl4：橄榄油=1:9），每周注射三次，隔一天一次，连续注射4周，取肝脏组织行Western Blot检测肝纤维化相关蛋白

 三、肝脏马松染色

腹腔注射CCl4的油剂溶液（50 ul/10g体重，CCl4：橄榄油=1:9），每周注射三次，隔一天一次，连续注射4周，取肝脏组织，10%福尔马林固定，制成石蜡切片行马松染色。

四、鉴定和评价的其他材料

1. Shrestha etal. Glutamine inhibits CCl4 induced liver fibrosis in mice and TGF-β1 mediated epithelial-mesenchymal transition in mouse hepatocytes. Food Chem Toxicol 2016, 93:129-37.

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