RT-PCR

      总RNA提取

      1. 取200mg组织，放到1.5ml EP管中，加入1ml Trizol剪碎。

      2. 震荡30s。

      3. 加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。

      4. 12000×g，4℃ 离心，15min。

      5. 吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。

      6. 加等体积异丙醇，-20℃，30min。

      7. 12000×g，4℃ 离心，10min。在管底部可见微量RNA沉淀

      8. 弃上清，加75%乙醇1ml，振荡。

      9. 7500×g，4℃ 离心，10min。

      10. 弃上清，用滤纸小心吸取残留液体，室温干燥5-10min。

      11. 沉淀溶于20μl DEPC水，取1μl加入79μl DEPC水测OD260/OD280

      12. 计算浓度与纯度，-70℃保存。

      逆转录合成 cDNA

      反应体系如下

      混匀快速离心一次

      反应条件如下

      -20℃ 冰箱冻存

      PCR反应

      混匀快速离心一次

      PCR产物-20℃冰箱保存

      取PCR产物8μl 加5×Loading Buffer 2μl 2%琼脂糖凝胶电泳120V

      100mA 30min 溴化乙锭染色，凝胶成象仪成象并保存结

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