大鼠母子分离早期离乳应激模型

一、研究背景

    生命早期（胚胎、新生儿、幼年）是机体脑发育的关键时期，对应激的敏感性极高。该时期的应激因素（如丧亲、长期与父母分离以及儿童期受虐或忽视），可破坏脑的结构和功能的形成，对机体产生长期甚至是终生的影响，其中对情绪和认知功能的影响最大，是青少年及成年神经精神疾患的高风险因素之一。

大鼠对环境的应激反应更为敏感，本研究建立了大鼠母子分离加早期离乳（Maternal separation with early weaning, MSEW）应激模型，用于模拟生命早期应激事件。这种双重应激模型更好的模拟了人类累计的应激效应（“cumulative” stress）导致青少年和（或）成年发生神经精神疾患的现象。本研究观察了MSEW模型雌雄大鼠成年的行为学表型和神经电生理变化。

二、制备方法

    1. 实验动物及分组：SD孕鼠。实验分为雌性对照，雌性MSEW组，雄性对照，雄性MSEW组。

2. 实验仪器：旷场实验箱、高架十字迷宫实验箱、条件性恐惧测试分析系统

3. 实验操作规程：

大鼠幼崽出生第二天至第五天(postnatal day，PND2-5天)，从母鼠家笼移出，放置在另外房间的母子分离实验箱，4h/d, 实验箱分隔成开放独立的小隔间，每个隔间内放置一只幼崽。实验箱放在加热垫上，温度维持在32℃左右。PND 6-16天, 母子分离8 h/d，母子分离实验在光照期进行，固定在8:00-18:00时间段。PND17天,大鼠幼崽离乳，雌雄分笼。正常对照组幼崽始终在母鼠家笼，至PND 21天离乳，正常换水，换料，其余不予干扰。PND 6O天，进行空场实验、高架十字迷宫实验、新物体识别实验、Y迷宫实验及Barnes 迷宫实验。行为学实验结束，每组取3只动物，麻醉，取脑，进行前额皮层神经电生理检测。

三、讨论和结论

    母子分离加早期离乳，雄性大鼠显示焦虑行为，而雌性大鼠未显示焦虑行为。在非应激状态下（ Y迷宫实验），雌性大鼠空间工作记忆能力下降。在应激状态下（Barnes迷宫实验），雌性和雄性大鼠的空间参考记忆能力均未受损。条件恐惧实验结果显示，雄性大鼠环境相关的恐惧记忆能力增强。电生理实验结果显示，雄性大鼠前额皮层谷氨酸能神经元的兴奋性下降，可能是其焦虑行为的产生机制之一。母子分离加早期离乳对成年大鼠影响的性别差异，还需要进一步研究。

该研究在已报导的小鼠母子分离加早期离乳应激方法基础上，首次制备了大鼠母子分离加早期离乳应激模型，注重了应激因素的累计效应，更接近临床。本模型对于揭示早期生活应激事件和成年后神经精神障碍的关系及分子机制研究具有一定意义。本模型的其他病理生理机制，还有待进一步研究。

四、鉴定和评价的其他材料

     1. Sun X, Zhang Y, Li X, Liu X, Qin C: Early-Life Neglect Alters Emotional and Cognitive Behavior in a Sex-Dependent Manner and Reduces Glutamatergic Neuronal Excitability in the Prefrontal Cortex. Front Psychiatry 2020, 11:572224.

            2. Sun X, Yu X, Zhang L, Zhao W, Wang M, Zhang Y, Li X, Gao R, Breger LS, Dovero S et al: Comparison of the expression and toxicity of AAV2/9 carrying the human A53T α-synuclein gene in presence or absence of WPRE. Heliyon 2021, 7(2):e06302.

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