代谢类疾病——肝脏缺血再灌注损伤模型

        肝脏缺血再灌注损伤（Hepatic Ischemia-Reperfusion Injury, HIRI）模型是研究肝脏手术、移植或休克等情况下缺血再灌注损伤机制的常用实验方法。以下是构建该模型的常见方法及关键注意事项：

一、常用建模方法

1. 部分肝缺血模型（选择性肝门阻断）

• ●适用场景：模拟肝叶或段缺血（如肝切除术中的Pringle手法）。

• ●步骤：

•        1.麻醉动物（大鼠/小鼠常用）。

•        2.腹正中切口暴露肝门，分离肝动脉、门静脉和胆管。

•        3.用无创血管夹阻断左/中叶肝蒂（通常70%肝缺血），避免全肝缺血引起的全身衰竭。

•        4.缺血一定时间（通常30-90分钟）后移除血管夹，恢复血流。

•        5.再灌注后观察数小时至数天，取材检测。

2. 全肝缺血模型

• ●特点：需建立门静脉-体静脉分流（避免肠道淤血），技术难度较高，常用于移植研究。

• ●步骤：

•         1.通过插管将门静脉血流分流至下腔静脉。

•         2.阻断肝动脉和门静脉，造成全肝缺血。

•         3.再灌注时移除阻断并关闭分流。

3. 原位肝移植模型

• ●应用：研究移植后的再灌注损伤。

• ●关键点：供肝冷保存后植入受体，再灌注时触发损伤。

二、技术要点与注意事项

●动物选择：

•        1.大鼠（SD或Wistar）最常用，小鼠适用于基因修饰研究。

•        2.需匹配年龄、体重（大鼠通常250-300g）。

  ●缺血时间控制：

•        1.部分缺血：30-60分钟可致中度损伤，>90分钟可能导致不可逆坏死。

•        2.全肝缺血：通常≤30分钟（啮齿类动物耐受差）。

  ●再灌注时间：

•        1.早期损伤（6-24小时）：氧化应激、炎症反应。

•        2.晚期损伤（24-72小时）：细胞凋亡/坏死高峰。

  ●监测指标：

•        1. 血清学：ALT/AST（肝酶）、LDH、炎症因子（TNF-α, IL-6）。

•        2.组织学：HE染色（坏死面积）、TUNEL（凋亡）、免疫组化（中性粒细胞浸润）。

•        3.氧化应激：MDA（脂质过氧化）、SOD/GSH（抗氧化能力）。

•        4.分子机制：Western blot（如HMGB1、NF-κB通路）。

  ●避免并发症：

•         1.体温维持（37℃垫板），防止低温影响结果。

•         2.术中补液（生理盐水），减少休克风险。

•         3.严格无菌操作，降低感染干扰。

三、模型优化与验证

•        ●假手术组：仅开腹不阻断血管，排除手术创伤影响。

•        ●预实验：确定最佳缺血/再灌注时间（因动物品系、实验室条件差异）。

•        ●动态观察：再灌注后多时间点取材，捕捉损伤动态变化。

四、局限性

•        ●种属差异：啮齿类与人类肝脏对缺血的响应不同。

•        ●临床转化：需结合大动物（如猪）模型验证。

五、参考文献方向

• 经典文献：

• Jaeschke H, et al. Mechanisms of Liver Injury. J Hepatol (2012).

• Zhai Y, et al. Hepatic Ischemia-Reperfusion Injury: Mechanisms and Therapeutics. Ann Surg (2019).

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