亲爱的小伙伴们,你们在细胞铺板的过程中,是否也经常遇到铺板不均匀的困扰呢?今天一起探讨下这个常见问题。
一 细胞铺板不均匀可能会产生以下影响:
实验结果一致性:导致实验结果的一致性较差,难以进行可靠的比较和分析。
数据可信度:降低数据的可信度,可能影响研究的科学性和准确性。
细胞生长状态:影响细胞的生长和分布,部分区域细胞过于密集,而其他区域细胞过少。
代谢差异:造成不同区域细胞的代谢状态差异。
实验偏差:增加实验的偏差和误差。
形态观察:不利于对细胞形态和结构的观察。
统计分析:给后续的统计分析带来困难。
药物实验:在进行药物筛选等实验时,影响结果的准确性。
二 细胞培养板孔数的选择
流式一般用 6 孔,MTT 一般用 96 孔,细胞爬片一般用 24 孔等,具体需要根据你的实验目的来定。
三 常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量
四 铺板均匀小技巧
a 10cm dish
前前后后,"十"字法,轻柔且缓慢,10次重复即可,显微镜下观察是否均匀。
b 6孔板和35 cm dish,12孔板以及24孔板
也是“前前后后”这样操作,然后镜下观察是否摇匀,要是不满意继续谣。(备注:12孔和24孔板晃的可以比6孔板更剧烈一点,切记不要让培养基溅到盖子上)
c 48孔板
轻拍孔板边缘!加入200-500μL左右细胞悬液,左手或右手水平持板,沿着4条边 依次轻拍数下,不要拘泥于拍顺序和位置,以镜下均匀为准。
d 96孔板
把你要的细胞悬浮成100μL,使用移液枪,垂直于平板缓慢滴加到板中央即可,只要够垂直够居中,一般不需要摇晃或者拍板就可以非常均匀。
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来源:细胞铲屎官