中药复方发SCI很难？！且看本篇文章的研究套路！

近年来，国家在中药研究方面加大了资金投入和政策支持，“中药复方研究”已成为科研热点和国自然基金重点扶持的领域。

图片来源：Pubmed

Pubmed显示，最近十几年来，“中药复方”的研究文章数量猛然增加，去年已发表SCI18034篇，今年截至目前已发14099篇，已然成为目前大家追捧的研究热点。中药具有多成分、多靶标的作用特点，所以当前很多研究都利用组学或者生物信息学的方法，全面挖掘中药作用的分子网络。但是，中药作用机制研究始终绕不开作用靶标和信号通路。其一，在组学和生物信息学的后续实验中，仍需对信号通路和靶标进行验证。其二，中药作用靶点虽多，却也有主次之分，探究中药作用的主要机制仍是当今研究的主旋律。那么中药的信号通路研究实验该如何设计呢？小知通过今天的高分文献解读，为大家揭开中药复方信号研究的基本套路。

一、背景介绍

动脉粥样硬化现在是全世界死亡和发病的主要原因。巨噬细胞来源的泡沫细胞的形成是动脉粥样硬化的标志，其受胆固醇摄取、细胞内代谢和外排的调节。PPARγ-LXRα-ABCA1/ABCG1通路在调节胆固醇外排中起重要作用，该通路可能是治疗动脉粥样硬化的有希望的靶点。然而，由于不良的全身效应，PPARγ激动剂治疗动脉粥样硬化仍然具有挑战性。许多中医药在动脉粥样硬化治疗中得到了很好的接受和应用。银杏通脉汤（YXTMD）已被应用于治疗动脉粥样硬化数十年。然而，这一机制仍有待探讨。 2021年4月28日，Pharmacological Research（IF：10.334）在线发表了一篇名为“Yin-xing-tong-mai decoction attenuates atherosclerosis via activating PPARγ-LXRα-ABCA1/ABCG1 pathway”的文章，作者构建了ApoE-/-的动脉粥样硬化模型，通过生物信息学方法和实验验证明确银杏通脉汤通过PPARγ-LXRα- ABCA1/ABCG1促进胆固醇外排，减轻炎症反应的作用，并进一步探究其可能的效应成分。

二、结果分析

使用临床等效剂量的银杏通脉汤干预ApoE-/-动脉粥样硬化模型小鼠，结果显示，银杏通脉汤不影响小鼠体重和食欲。肉眼观、油红O染色、HE染色均显示，银杏通脉汤显著减少模型鼠的动脉斑块数量、大小，增加斑块中胶原蛋白量。同时，银杏通脉汤不影响肝功能。

银杏通脉汤不影响游离脂肪酸、甘油三酯、胆固醇含量、但减少模型鼠血清中低密度脂蛋白，提高高密度脂蛋白水平。同时，银杏通脉汤可降低血清中IL-6、TNF-α等炎症介质的水平。通过免疫荧光显示，银杏通脉汤减少斑块中泡沫细胞的聚集，减少巨噬细胞脂肪储存能力，上调胆固醇外排转运体ABCA1 和ABCG1的表达。

细胞实验显示，银杏通脉汤不影响RAW264.7巨噬细胞的活力，但显著减少巨噬细胞的脂滴沉积，胞内胆固醇、甘油三酯含量，增加ABCA1 和ABCG1表达，下调炎症因子含量，且呈剂量依赖性。

转录组测序显示，银杏通脉汤作用后，PPARγ基因表达显著增强。基于PPARγ对LXRα-ABCA1/ABCG1介导的胆固醇外排的调控作用，作者选择了PPARγ进行验证。RT-PCR验证了测序结果。利用动物试验，PPARγ蛋白在斑块中的的表达在银杏通脉汤作用后显著上调。细胞实验也显示，PPARγ和EXRα在银杏通脉汤作用后显著上调。

在体外实验中，采用慢病毒敲减PPARγ。银杏通脉汤作用组的PPARγ, LXRα, ABCA1, 和 ABCG1表达显著减少，胆固醇外排减少，胞内甘油三酯和胆固醇增加，炎症因子分泌增加，表明，银杏通脉汤通过活化PPARγ抑制炎症，促进胆固醇外排。

通过HPLC-MS检测银杏通脉汤中的成分，鉴定出243个。通过Pubchem数据库检索可能作用于PPARγ的潜在有效成分，得到20个可能成分。通过分子对接发现，20个成分中，金雀异黄素、绿原酸和儿茶素与PPARγ具有佳的结合能力。可能是作用于PPARγ的主要成分。

三、总结套路

通过分析，本文的研究套路可以分为四步：

第一步：动物实验验证疗效

第二步：转录组学筛选机制

第三步：细胞实验中，抑制/敲减信号通路的关键分子，验证信号通路

第四步：网络药理学/成分检测结合分子对接揭示成分靶标互作

中药方剂是中医治病的基础，是中医学的核心，很多名方古方，经过上千年的临床实践验证，其疗效得到了医生和病人的广泛认可。然而，在高质量的SCI杂志中关于中药复方的机理与临床观察相关研究报道均屈指可数。主要原因可能是：1. SCI科学体系的基础是要求可重复性，中医复方制剂的标准化成为主要门槛。只有在药物配比与药用成分的提取做到标准化，才能具备发表SCI文章的前提。2. 中药多靶点的特点与机理的复杂性，是制约中药复方开展深入研究又一瓶颈。需要采取广泛认可度的方法和技术进行合理分析，既需符合现代科学的基本认知，又要兼顾了中药机理的复杂性与系统性。3. 信号通路是大多数药物机理研究的主要抓手，中药复方对实体组织和细胞的信号通路调控具有一定复杂性。本篇文章研究逻辑清楚，将复方-成分-靶标-通路-效应串联成一个完整的故事；另外动物与细胞实验相结合，动物看疗效，细胞做机制，降低了实验难度；同时，作者关注到了药物的毒性，也让审稿人信服。本文理论依据充分，数据广泛也具有针对性，符合SCI科学体系的基本逻辑。当然，不足之处也有，比如， 在细胞实验中，如果选择原代细胞会让结果更加可靠，成分-靶点之间的互作在分子对接之后，还可以通过实验确证相互作用，以提高实验结果的可靠性，这也是发表更高分文章所必备的。

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